连续给B16-BL6黑色素瘤荷瘤脱氧尿苷，以标记所有增殖细胞。在给予硼10载体后，肿瘤接受了反应堆热中子束辐照。腹膜内注射急性缺氧释放剂，MTH（40°C持续60分钟），并连续24h皮下输注TPZ或TPZ和MTH联合治疗后。辐射后，立即分离出一些肿瘤的细胞，并与胞质分裂阻滞剂一起孵育。使用BrdU免疫荧光染色，基于微核的频率评估Q和总肿瘤细胞群的反应。在其他荷瘤小鼠中，放射后17天，计数了宏观的肺转移。

BPA-BNCT比BSH-BNCT增加了总肿瘤细胞群的敏感性。但是，用BPA处理的Q细胞的敏感性低于BSH处理的Q细胞。在有或没有硼10载体的情况下，与连续给药的TPZ的组合均可提高总细胞和Q细胞的敏感性。即使没有照射，烟酰胺治疗也减少了肺转移的数量。通过辐射，BPA-BNCT，特别是与TPZ和MTH的联合处理以及烟酰胺处理相结合，显示出比BSH-BNCT减少更多数量的潜力。

BSH-BNCT与TPZ联合或不联合MTH可以改善局部肿瘤控制，而BPA-BNCT与TPZ和MTH以及烟酰胺联合可以减少肺转移的数量。阐明了对原发性实体瘤中的慢性低氧丰富Q细胞群的控制有可能影响整个局部肿瘤的控制，以及对原发性实体瘤中对急性缺氧性总肿瘤细胞总数的控制。有可能影响肺转移的控制。

硼中的中子俘获反应原则上对破坏肿瘤非常有效，只要目标肿瘤中可以积累足够量的硼10，并且足够低的数量能量热中子可以被传递。在此反应中生成的两个粒子具有很高的线性能量转移，并且具有大约一个或两个肿瘤细胞直径的范围。如果可以在肿瘤组织的间隙或肿瘤细胞的细胞内空间选择性地积累硼10原子，则理论上可以杀死肿瘤细胞而不影响相邻的正常细胞。因此，成功的硼中子俘获疗法（BNCT）需要选择性地输送大量10B转移至肿瘤细胞。

BNCT临床试验中使用的两种常见的硼10携带者是巯基十二烷基十二硼酸钠硼10，用于治疗恶性神经胶质瘤，黑素瘤，无法手术的头颈部肿瘤和口腔癌。BSH释放依赖于血液通过破坏的血脑屏障从血液被动扩散至脑肿瘤。因此，使用BSH会导致BNCT期间血液中硼的浓度较高，并随后损害血管。BPA被设计为通过转运蛋白介导的机制通过癌细胞膜的主动转运来吸收，尤其是芳香族氨基酸转运蛋白LAT1。即使在正常细胞中该转运机制也起作用，从而导致正常大脑中BPA的积累，尽管其发生率较低。因此，已经提出可以通过组合BSH和BPA两者来改善肿瘤应答。

已经开发出对低氧细胞特别有毒的生物还原剂，已被认为是解决癌症放射疗法中抗放射肿瘤低氧问题的一种有前途的方法。Tirapazamine（TPZ）是生物还原性低氧细胞毒素发展的主要化合物，与辐射结合已显示可用于整体控制实体瘤，尤其是用于控制富含低氧区域的静态（Q）肿瘤细胞群。肿瘤缺氧由有限的氧气扩散或有限的灌注引起。仅通过单次施用TPZ即可杀死存在于氧扩散距离边缘的慢性低氧肿瘤细胞。在长期连续给药期间，TPZ可以杀死散在整个实体瘤中的急性缺氧肿瘤细胞。即长期连续施用TPZ可以杀死慢性和急性低氧的肿瘤细胞。

温和的温度热疗被报道提高了肿瘤对辐射通过增加肿瘤血流改善氧合响应。此外，还显示出MTH增强了对TPZ的肿瘤反应，尤其是肿瘤内Q细胞群的肿瘤反应。同时，现在已知，在当前可用的加热技术的典型热疗过程中，仅在小亚体积的肿瘤中才能达到细胞毒性温度。MTH对组织的影响微妙。然而，MTH的效果，包括热介导的肿瘤复氧和亚致死的抑制和潜在致死性损伤修复中，联合使用MTH与放射疗法提供了有力的理论基础。此外，MTH的生理和细胞作用可以改善药物载体的传递，激活用于热介导的基因治疗的启动子，并通过多种机制增强对肿瘤的免疫反应，包括肿瘤细胞表达抗原和产生热休克蛋白。

转移是导致癌症死亡的主要原因，它涉及一个复杂的，多步骤的过程，肿瘤细胞通过该过程扩散到远处以建立不连续的次生菌落。据报道，急性和周期性缺氧，而非慢性缺氧显着增加小鼠自发性肺转移的数量约2倍，并且这种影响是由于急性缺氧治疗对原发性肿瘤的影响，而不是对治疗的其他潜在影响，例如对肺上皮的损害。根据此报告，研究人员报道了将急性缺氧释放剂烟酰胺注射到荷瘤小鼠中作为高剂量率γ射线辐射联合治疗对减少肺转移性结节的重要性。在这里，研究人员试图使用易于转移的鼠类黑色素瘤细胞系来分析10种B型携带者以及操纵或利用肿瘤内低氧对BNCT中局部肿瘤反应和肺转移潜能的影响。中子俘获反应是用两种载流子BSH和BPA进行的。通过用急性缺氧释放剂治疗肿瘤缺氧，可以抑制其对肿瘤血流或MTH暂时性波动的抑制作用，这种抑制作用显示有可能从扩散受限的慢性缺氧中释放肿瘤细胞。此外，研究人员试图从局部肿瘤反应和肺转移潜力方面分析连续长期长期服用BNCT中TPZ和MTH的联合治疗的有效性。关于局部肿瘤反应，使用研究人员有选择地检测固体中Q细胞反应的原始方法，不仅评估了对总肿瘤细胞群体的影响，而且还评估了对仅Q肿瘤细胞群体的影响。

当细胞分裂被破坏或染色体被化学物质或辐射破坏或破坏时，细胞分裂过程中两个子核之间遗传物质的分布会受到影响，两个子核中的任何一个都不能包含碎片或整个染色体。未整合到新核中的遗传物质形成其“微核”。因此，微核的形成频率很好地反映了化合物和辐射的遗传毒性。可以通过计数仅显示红色荧光的双核细胞中的微核来检查未用BrdU标记的细胞中的MN频率。MN频率定义为双核细胞中微核数量与观察到的双核细胞总数之比。

在未用BrdU预处理的肿瘤中获得的比率表明总肿瘤细胞群中所有阶段的MN频率。计数了300多个双核细胞以确定MN频率。

照射后立即使用体内-体外测定方法，对未给予BrdU的小鼠体内植入的肿瘤进行克隆细胞存活测定。通过在37°C下在含有0.05％胰蛋白酶和0.02％EDTA的PBS中搅拌20分钟，将未标记BrdU的肿瘤切除，称重，切碎和分解。将来自单细胞悬液的适当数量的活肿瘤细胞接种在60或100mm组织培养皿上，然后12天后，用乙醇固定菌落，用Giemsa染色并计数。对于未接受辐照的肿瘤，列出了总肿瘤细胞群的接种效率以及总细胞和Q细胞群的MN频率。。铺板效率表明当肿瘤没有受到照射时，接种到细胞中的细胞所占的百分比。存活给定剂量的细胞分数是通过计数宏观菌落的数量作为接种的细胞数量的分数来确定的，其后是允许量，即除以铺板效率。

显示了总肿瘤细胞群的镀覆效率和MN和未照射的总和Q细胞群的频率。TPZ处理在每种条件下在总细胞群和Q细胞群中均导致SFs显着降低，而MN频率更高。此外，在TPZ处理中添加MTH导致在所有条件下两个细胞群体中的SF进一步降低，而MN频率更高。另一方面，在每组条件下，Q细胞群体的MN频率均显着高于总细胞群体。不用说，烟酰胺或TPZ给药组的数据不仅受药物本身的影响，而且受给药过程压力的影响。同样，MTH给药组的数据不仅受到温和温度加热本身的影响，而且还受到手持特殊构造装置的约束和下拉引起的下肢牵引力的影响。

如研究人员先前的报告所示，与TPZ或MTH联合使用的SCCVII肿瘤中硼10浓度的变化表明，只有MTH可以增加硼10对肿瘤的吸收，而与TPZ联合使用对肿瘤的硼10摄取潜力基本上没有影响。同样在这项研究中，与TPZ联合使用对B16-BL6肿瘤的硼10摄取潜力几乎没有影响。因此，表2显示了除TPZ联合治疗外，每种情况下放射肿瘤中硼10的浓度。该值是使用10得到的平均值B在照射时间的起点和终点处的浓度。当将BPA用作硼10载体时，MTH的浓度增加趋势要比烟酰胺高。相反，以BSH为硼10载体时，烟酰胺比MTH倾向于增加浓度。